在SPE小柱的使用過程中有許多老師會疑惑流速問題。在通常的情況下，我們對于正常流速要求是0.5滴到1滴每秒。流速慢，導致實驗周期長，流速快，有可能導致回收率不穩(wěn)定。那么今天我們就來深入討論一下影響SPE流速因素吧。

原因一：樣品制備問題

大多數(shù)流速問題產(chǎn)生的原因都是樣品制備不充分。比如樣品渾濁，離心過濾不充分導致上樣時候篩板堵塞，或者是樣品本身的蛋白等大分子物質未經(jīng)過充分的處理，沒有進行有效蛋白沉降，導致篩板堵塞。這類原因造成的流速問題可以通過改善前處理手段來解決。所以說樣品制備充分是保障SPE正常流速的第yi步。

原因二：小柱本身因素（填料粒徑和柱管體積）

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填料粒徑的影響

填料粒徑大填裝越松散，對流動相阻力小，流速越快；粒徑越小，填裝越緊致，流速越慢。這種現(xiàn)象在弗羅里硅土和硅藻土小柱上表現(xiàn)得很明顯。一般小柱填料粒徑的范圍是40-60um，農(nóng)殘級的弗羅里硅土粒徑范圍在75-150um，大孔硅藻土小柱600-900um。所以弗羅里硅土和硅藻土小柱的流速會比一般小柱流速快，尤其是大孔硅藻土小柱，使用時需要加上包裝中配套的導流針來控制流速。

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柱管體積的影響

對于同種填料的產(chǎn)品，當填料量一定時，使用的柱管體積越小流速越慢。這是因為柱管體積越小，橫截面小，填裝高度越高，所以流動相阻力會增大，導致流速變慢。所以在實際檢測工作中，如果對上樣量和上樣流速有要求，在不影響固相萃取效果的前提下，可以選擇大體積柱管或者高通量的膜片裝置，CNW的DISK圓盤上樣速度可以達到50ml/min,在處理大規(guī)模水樣時有明顯的流速優(yōu)勢。

原因三：溶劑的選擇和使用

溶劑的選擇是很多老師在實驗過程中容易忽視的點，比如：C18小柱，一般用甲醇活化，如果用水活化，由于C18的疏水性，水的浸潤速度會慢于甲醇，導致流速變慢。遇到這種情況，調整活化溶劑就可以解決問題了。

溶劑使用順序也會影響流速，比如活化溶劑為二氯甲烷，平衡溶劑為水，由于二氯甲烷和水不互溶，所以活化平衡時流速就會很慢。這種情況我們建議在兩種不互溶的溶劑之間加入過渡溶劑甲醇，這樣就可以解決問題了。

原因四：空氣層影響

空氣層會阻礙液體的流路從而造成流速問題。篩板或者填料松動是形成空氣層的主要原因。商品化的產(chǎn)品經(jīng)過運輸?shù)竭_用戶手中，在運輸過程中，填料和篩板間若發(fā)生了位移松動，就容易形成空氣層。這種空氣層有時比較明顯，可以看到填料有斷層或者細縫。有時這種松動不明顯，只能在小柱使用過程中感受到流速上的差異。這種情況下，輕微的松動問題可以通過壓實篩板或者施加正負壓趕走空氣就可以解決了。

除了運輸過程可能造成篩板松動，在小柱的SPE洗脫程序中，如果在活化平衡階段不小心讓溶劑走干了，也會使填料中進入空氣導致影響流速。這個時候通過加壓或者抽真空排走空氣就可以解決問題了。

總結下來影響小柱流速的因素主要有以下幾個：樣品制備，填料粒徑和柱管體積，溶劑選擇和使用以及空氣層的影響。當然還會有一些別的影響因素， 各位老師在實驗過程中如果有流速方面問題，可以先排查一下這些因素，也可以聯(lián)系我們安譜實驗哦，我們的熱情24小時在線哦~